新冠肺炎核酸檢測PCR實(shí)驗(yàn)室

　　通常醫(yī)院檢驗(yàn)科和病理科等科室使用的實(shí)驗(yàn)室為生物安全二級（BSL-2）實(shí)驗(yàn)室。但新冠病毒核酸檢測用PCR實(shí)驗(yàn)室則不同，《醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)熱門診臨床實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)專家共識（2020 版）》說明：對于用于新冠病毒檢測的PCR實(shí)驗(yàn)室（以下簡稱“PCR實(shí)驗(yàn)室”）選址宜設(shè)置在發(fā)熱門診內(nèi)，且建筑標(biāo)準(zhǔn)宜滿足加強(qiáng)型醫(yī)學(xué)BSL-2實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)。

　　《醫(yī)學(xué)生物安全二級實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》T/CECS 662-2020則對加強(qiáng)型醫(yī)學(xué)BSL-2實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)要求進(jìn)行了規(guī)定。《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》對PCR實(shí)驗(yàn)室布局和流程進(jìn)行了明確規(guī)定。

　　《關(guān)于印發(fā)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)導(dǎo)則（試行）的通知》則對檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)做出了整體要求。下面結(jié)合上述四部規(guī)范相關(guān)要求和實(shí)際建設(shè)的PCR實(shí)驗(yàn)室案例對建設(shè)要點(diǎn)進(jìn)行梳理

   一、1PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)合理選址和布局

　　標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室一般分為四個區(qū)，一區(qū)為試劑準(zhǔn)備區(qū)，二區(qū)為標(biāo)本制備區(qū)，三區(qū)為PCR擴(kuò)增區(qū)，四區(qū)為產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。各實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。場地一般要求在80平米以上，此標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室可開展包括新冠病毒在內(nèi)的常規(guī)分子檢測項(xiàng)目。而如今市面上絕大部分新冠病毒檢測試劑盒是在熒光定量PCR平臺上開發(fā)的，因此沒有產(chǎn)物分析區(qū)也不會影響新冠病毒的檢測，60-80平米的場地就能滿足要求，但是其他如基于一代測序與基因芯片的檢測項(xiàng)目就無法開展。

　　PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)合理規(guī)劃檢驗(yàn)人員

　　PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本制備室的生物安全要求最高，檢驗(yàn)人員進(jìn)入該區(qū)域緩沖間前需要在更衣室穿防護(hù)服，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后在緩沖間脫掉防護(hù)服，因此需要設(shè)置更衣室和合理規(guī)劃進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室動線。

　二、PCR實(shí)驗(yàn)室氣流組織應(yīng)符合定向氣流原則

　　氣流組織應(yīng)有利于室內(nèi)氣流由被污染風(fēng)險(xiǎn)低的空間向被污染風(fēng)險(xiǎn)高的空間流動，最大限度減少室內(nèi)回流與渦流。通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)保證各工作區(qū)的空氣不產(chǎn)生交叉污染。

　　實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。

　　標(biāo)準(zhǔn)制備區(qū)要保持負(fù)壓

　　標(biāo)本制備區(qū)為實(shí)驗(yàn)室核心工作區(qū)，其主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時(shí)cDNA的合成。取樣時(shí)病毒還未滅活，且在取樣操作時(shí)，容易造成氣溶膠擴(kuò)散。為保護(hù)人員安全，必須在生物安全柜內(nèi)操作，防止標(biāo)本氣溶膠的擴(kuò)散。此后，標(biāo)本經(jīng)過滅活處理，使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，使操作人員在對樣本進(jìn)行檢測時(shí)相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。后續(xù)操作時(shí)主要防止含有病毒核算的氣溶膠污染造成“假陽性”現(xiàn)象。因此，該區(qū)會產(chǎn)生污染源物，該區(qū)對緩沖間和試劑準(zhǔn)備室保持負(fù)壓，負(fù)壓值小于擴(kuò)增分析室。

　　三、核酸檢測實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的幾個關(guān)鍵點(diǎn)

　　1、平面布局：不論是組合式還是分散式布置的PCR實(shí)驗(yàn)室，各功能房間均宜設(shè)置獨(dú)立緩沖間。

　　2、區(qū)域空氣流向：為避免交叉污染，PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。

　　3、通風(fēng)空調(diào)：為避免交叉污染，各功能用房內(nèi)空氣不能摻混。混合式PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用新風(fēng)直流空調(diào)系統(tǒng)，當(dāng)采用新風(fēng)系統(tǒng)有困難時(shí)，各區(qū)域的空氣只能在自己的房間內(nèi)循環(huán)。

　　4、生物安全：按照新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）的規(guī)定，2019-nCoV病原體暫按照第二類病原微生物進(jìn)行管理，則樣本植被區(qū)宜為負(fù)壓或加強(qiáng)型P2實(shí)驗(yàn)室，核酸操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。

　　關(guān)鍵技術(shù)措施包括：

　　*絕對負(fù)壓（避免室內(nèi)潛在污染外泄）

　　*氣流組織（室內(nèi)定向流，從低污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)流向高污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)）

　　*排風(fēng)無害化處理（高效過濾、高空排放）

　　四、核酸檢測實(shí)驗(yàn)室氣流組織建議

　　1、氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。

　　2、在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點(diǎn)的上方附件不得設(shè)送風(fēng)口

　　3、高效過濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙；

　　4、不能以回（排）風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)高效過濾裝置與排風(fēng)總管的連接必須全部是實(shí)體風(fēng)管。